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液相色譜儀幾方面的介紹

點(diǎn)擊次數(shù):4750 更新時(shí)間:2010-01-11
1、高山壓恒流泵
特點(diǎn):雙泵頭串聯(lián)式
  微機(jī)控制 通過(guò)鍵盤(pán)設(shè)定參數(shù)(時(shí)間、流量、壓力、淋洗液比例)。
  單相閥、活塞、閥座均為寶石耐磨損;密封圈為特種塑料耐高壓。
  10種工作程序 具有過(guò)壓保護(hù)、斷電保護(hù)及自診斷等功能。
  可作單泵恒流輸出或雙泵梯度淋洗。
創(chuàng)新:為了消除壓力波動(dòng),凸輪曲線以阿基米德螺旋線為基線再加以修正;采用混合式4相8拍步進(jìn)電機(jī),并由細(xì)分16步的驅(qū)動(dòng)器驅(qū)動(dòng);增加機(jī)械微調(diào)和特制的緩沖器;實(shí)時(shí)微機(jī)控制,壓力及時(shí)反饋,從而消除壓力波動(dòng),攻克了長(zhǎng)期阻撓我國(guó)液相色譜儀前進(jìn)步伐的"輸出壓力高且穩(wěn)定"的技術(shù)難關(guān)。
2、紫外分光檢測(cè)器
特點(diǎn):
  - 先進(jìn)的光學(xué)系統(tǒng)
  全息凹面光柵、光纖分光構(gòu)成全新概念的雙光束分光。
  - 微機(jī)控制
  鍵盤(pán)設(shè)定控制步進(jìn)電機(jī)調(diào)動(dòng)光柵選定波長(zhǎng)(固定波長(zhǎng)、局部掃描、全程自動(dòng)掃描、單步和能量測(cè)試)
創(chuàng)新:紫外分光檢測(cè)器是液相色譜儀關(guān)鍵之所在,而靈敏度是紫外分光檢測(cè)器的關(guān)鍵之所在。為了降低噪音提高靈敏度,我們開(kāi)發(fā)出*的光路系統(tǒng):采用全息凹面光柵,不用反射鏡(反射一次損失20%光能),通過(guò)光纖分光去除雜散光簡(jiǎn)化了光路;利用微機(jī)進(jìn)行基線跟蹤和噪聲處理。這樣不僅減少了光能量傳輸損耗,保證zui大光能量;而且大大提高了信噪比,保證了靈敏度高、穩(wěn)定快。
3、色譜分離柱
3-1 柱的結(jié)構(gòu)
  1、堵棒(或?qū)Ч埽?、接頭 3、接頭 4、密封圈 5、螺帽 6、柱密封圈 7、柱管 8、柱填料 9 10、過(guò)濾片
        3-2 柱的分類:
根據(jù)所有的擔(dān)體材料分為三種:
  a.硅膠型:機(jī)械強(qiáng)度高,易制成小顆粒,理論塔板數(shù)高。
  b.聚全物型:在廣泛的PH值范圍內(nèi)穩(wěn)定
  c.羥基磷灰石型:對(duì)蛋白質(zhì)等生物高分子樣品有特殊的選擇性。
根據(jù)分離方式分類:
  a.硅膠型
   1) 正相:SIL--磷脂、NH--糖、維生素E,CN--甾類激素。
   2) 反相:ODS(C18)、(C8 CN TMS Pheny1)低分子量化全物。
   3) 離子交換:
     WAX(弱堿陰離子交換)--核苷酸、蛋白質(zhì)
     WCX(弱酸陽(yáng)離子交換)--蛋白質(zhì)
     SAX(強(qiáng)堿陰離子交換)--核苷酸
     SCX(強(qiáng)酸陽(yáng)離子交換)--兒茶酚膠
4)凝膠過(guò)濾:
     Diol--蛋白質(zhì) GF--蛋白質(zhì)
  b.聚合物型:
   1)反相:ODP--50--肽,蛋白質(zhì),低分化合物。
   2)離子交換:ISC--氨基酸,胍類化合物,ISA--糖,IC--無(wú)機(jī)離子,PA--蛋白質(zhì),ES--蛋白質(zhì)。
   3)配位交換:SCR(磺化聚苯乙烯)--糖。
   4)離子排阻:SCR-101H 102H--有機(jī)酸
   5)凝膠過(guò)濾:ION--多糖 GS--水溶性分子
   6)凝膠滲透色譜(GPC):GPD--合成分子、橡膠。
   7)羥基磷灰石型:HPC--蛋白質(zhì)、核苷酸
按尺寸分類:
  1.制備:30mm 50mm 內(nèi)徑,半制備:20mm內(nèi)徑。
  2.分析:標(biāo)準(zhǔn)型柱:4_8mm內(nèi)徑。
      快速色譜柱:3mm內(nèi)徑、5cm長(zhǎng)、4.6mm內(nèi)徑。
      小孔徑柱:2.5mm內(nèi)徑,微孔徑柱1mm內(nèi)徑。
3-3柱的技術(shù)指標(biāo)
  *耐壓:不小于40Mpa。
  *滲透性:反相--流動(dòng)相甲醇1ml/min,壓力3Mpa。
       正相--正乙烷1ml/min,壓力3Mpa.
  *柱效:理論塔板極數(shù)>3x103
  *對(duì)稱柱:葸峰不對(duì)稱因子AS在0.8~2.0范圍內(nèi)。
  *外觀:光潔、標(biāo)牌、尺寸、填充劑、流動(dòng)相方向、日期等
ODS柱
  ODS(C18)色譜柱是將十八烷基鍵合在擔(dān)體的表面,然后填充的柱,在HPLC中應(yīng)用廣。在HPLC中反相色譜的引用占70%,其中極大部分 使用的是ODS(C18)。本公司所附的柱也是ODS(C18)柱,內(nèi)徑4.6mm,長(zhǎng)度150mm。
一般反相色譜系統(tǒng),流動(dòng)相為極性溶劑,如水、甲醇、乙腈,非極性固定相,如十八烷基。反相系統(tǒng)簡(jiǎn)單,重復(fù)性好,柱子能長(zhǎng)期穩(wěn) 定工作,能完成分離、分析任務(wù)的60-80%,所以分析工作者使用得zui多的是反相柱。
柱的使用和維護(hù)
  由于柱的質(zhì)量直接影響到樣品組分得分離情況,組分的定性,定量分析,所以在操作時(shí)必須十分注意。
  通常柱子損壞表現(xiàn)為:柱壓升高,柱效下降,保留值改變,峰形崎變等。
以反相為列,它要求填料處于甲醇或乙腈中,不使柱子干枯,并注意下列事項(xiàng):
  * 勿使柱子受較強(qiáng)振動(dòng)
  * 較長(zhǎng)時(shí)間不用時(shí),應(yīng)在柱中充滿甲醇,并把兩頭封死,盡量不使干枯。
  * 當(dāng)用水和甲醇(或乙腈)混合液體溶劑時(shí),工作結(jié)束后必須用純甲醇沖洗30分鐘至1個(gè)小時(shí),使柱子處于甲醇中,因水   易繁殖微生物, 使柱子堵塞,并降低柱效。
  * 當(dāng)使用KH2PO4等緩沖液時(shí),鹽的濃度宜低,否則鹽容易析出,柱效降低,柱壓升高,使用后   必須用水沖洗( 絕不能用甲醇沖洗)使緩沖液全部溶于水排出,然后再用甲醇沖洗。
  * 硅基固定相不宜在PH>8時(shí)使用,此時(shí)容易產(chǎn)生絮狀物析出,堵塞柱子。
  * 當(dāng)流動(dòng)相呈酸性時(shí),使用后必須用水沖洗,因酸使柱效降低,后再用甲醇沖洗。
  * 流動(dòng)相經(jīng)過(guò)過(guò)濾處理。
  * 樣品也經(jīng)過(guò)過(guò)濾處理。
  * 樣品有時(shí)能復(fù)蓋填料得活性點(diǎn),使柱壓升高,保留時(shí)間下降,防止方法是樣品經(jīng)過(guò)過(guò)濾。
  * 樣品組分的不可逆吸附,使柱壓升高,柱效降低(通常易被吸附的有蛋白質(zhì)、糖)防止方法是加保護(hù)柱和溶劑反沖,   zui常用的是四氫呋喃。
  * 當(dāng)流動(dòng)相從A換到B時(shí),A、B不相溶,必須選擇一能同A、B互溶劑C,先換成C再把C換成B,zui常用的中間液是異丙醇。
  * 由于長(zhǎng)期使用,在較大的壓力下,擔(dān)體破裂而流失在柱前端形成一段空隙,使柱效下降,峰形畸變。維護(hù)方法:卸下   接頭,用甲醇把填料調(diào)成糊狀,填入柱內(nèi),同時(shí)將過(guò)濾片用超聲波清洗機(jī)清洗一次

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